更新时间：2022-08-25 14:22
糖残基即糖类物质水解之后得到的水解基团，一般由双糖或多糖类物质水解得到。糖苷一般由残基（糖残基）和配基（非糖部分）组成，糖的残基和配基之间的键称为苷键。多糖类物质由多个单糖残基以糖苷键连接形成的多聚物，例如直链淀粉和支链淀粉等。
糖原(glycogen)又称肝糖，以颗粒形式存在于肝细胞(肝糖原)和肌肉(肌糖原)中。它是经一系列酶催化反应，将多个葡萄糖组合而成的分支多糖，其功能与植物的淀粉相似，所以又叫动物淀粉。糖原是动物的储备多糖，当生物体一旦不能从外界获得营养物质时，储存糖原就可在酶的作用下，释放出葡萄糖以供生物体能量消耗的需要。
糖原为无定形粉末，不溶于冷水，易溶于热水，其水溶液遇碘显棕红色。糖原能被α一淀粉酶水解。与支链淀粉类似，糖原也是由α-D-葡萄糖通过α-1，4-苷键和α-1，6-苷键连接成的多糖。糖原分支程度更高，支链更多、更短，每隔8～10葡萄糖残基就有一个支链，相对分子质量高达1×108。
糖原存在于如肝脏和骨髂肌这些组织内的微小颗粒中；这些颗粒也含有紧密结合的糖原磷酸化酶和糖原合成酶。肝糖原的葡萄糖残基进行经常的非常快的转换，因为大量的葡萄糖和其它己糖从小肠到达肝脏，在经过暂时地以糖原贮存后，又再以血糖的形式离开肝脏。并非糖原的高度分支结构的所有部份都以同样的速率转换。大多数葡萄糖残基的转换发生在外周分支，而糖原的内核结构代谢较为稳定，其转换速率很低。
1、原理
糖内的各种糖残基具有与胶体金标记的外源凝集素(lectin)特异性结合的特性，因而糖残基可得到显示。本法是Roth(1983)建立，村田长芳(1985)改进的。
2、试剂配制
(1)磷酸缓冲等渗氯化钠液(pH7.4) (PBS)：氯化钠0.9g，溶于磷酸缓冲液100ml中。
(2)胶体金标记的外源凝集素溶液：按凝集素25～50μg/ml的浓度用PBS配制。外源凝集素的种类较多，伴刀豆球蛋白(Concanavalin A，Con A)、蓖麻凝集素(ricinus communis agglutinin—Ⅰ，RCA—Ⅰ)、花生凝集素(peanut agglutinin，PNA)、麦胚凝集素(wheat germ agglutinin，WGA)、荆豆凝集素(ulex europeus，UEA—Ⅰ)等。
3、步骤
(1)新鲜的小片组织(大小为0.5～1mm3左右)放入0.5%或1%戊二醛磷酸缓冲等渗氯化钠溶液(pH7.4)，或者2%多聚甲醛(paraformaldehyde)PBS一0.1%戊二醛PBS等量混合液(pH7.4)，4℃乃至室温下固定2～3h之后，必要时再入0.5%氯化铵PBS液中，室温下作用2h，以封闭游离的醛基。组织片用LowicrylK4M进行低温包埋，制作超薄切片，捞到贴有formvar支持膜的镍网上。
(2)PBS洗5min。
(4)PBS充分洗。
(5)胶体金标记的外源凝集素溶液中，室温下反应30～60min。
(6)PBS洗2次。各3～5min。
(7)蒸馏水洗。
(8)醋酸铀染色5min。
(9)乙酸铅染色2min。
(10)蒸馏水洗。
(11)镀碳。
4、结果
α—D一甘露糖、α—D一葡萄糖(Con A)，β—D一半乳糖(RCA—Ⅰ)，N一乙酰一D一半乳糖胺(PNA)，N一乙酰一D一葡糖胺(WGA)，α—L一岩藻糖(UEA—Ⅰ)等的残基上有胶体金粒子存在。对照为阴性
5、注意事项
(1)包埋用树脂，Epon812也可以用，但糖残基的检出率极低，效果甚差。
(2)Lowicryl K4M对电子射线的抵抗力弱，步骤(11)镀碳是为了增强其抵抗力。
(3)为确定本反应对各种糖残基是否是特异的，应做必要的对照。其方法是在步骤(5)使用的胶体金标记外源凝集素溶液中，分别加入0.1～0.15mol/l。浓度的各自的单糖，然后进行(6)以下各步骤之后，其结果如反应变成阴性则可认为本法是特异的。
(4)本法是直接标记法。还有间接标记法：切片先与未标记的外源凝集素反应，PBS洗，然后再与胶体金标记的糖蛋白(过氧化物酶、卵类粘蛋白等)反应，PBS洗后，蒸馏水洗净，乙酸铀、乙酸铅双染色，效果也好。